【产品描述】 EZ Trans细胞转染试剂作为新一代的转染试剂，其转染原理是带正电的阳离子聚合物与核酸中带负电的磷酸基团形成带正电的复合物后与细胞表面带负电的蛋白多糖相互作用，并通过胞吞作用进入细胞。 经过李记生物的优化处理，本产品具有转染效率高，细胞毒性低，操作简单，重复性好，适用范围广等特点。 【订购信息】 产品名称 货号 规格 价格 EZ Trans细胞转染试剂（高效） AC04L091 1 mL 300 EZ Trans细胞转染试剂（高效） AC04L092 50 mL 3200 【

化学法：磷酸钙法、DEAE-右旋糖苷法、阳离子脂质体法； 物理法：电穿孔法、显微注射法、biolistic颗粒传递法； 病毒介导法：逆转录病毒、腺病毒 A. 阳离子脂质体法：带正电的脂质体与核酸带负电的磷酸基团形成复合物被细胞内吞。 特点：简单通用，适用性广，转染效率高，重复性好，但转染时需除血清，转染效率随细胞类型变化大。由于脂质体复合物与贴壁细胞的接触机会远大于悬浮细胞，所以贴壁比悬浮转染效率要高。悬浮细胞建议使用电穿孔

最近在做hepG2细胞转染，使用lipo2000转染，效率奇低无比；用了电转，细胞都容易转死，有没有好的转染试剂？或者好的电转染试剂？

用公司已经包装好的病毒上清，转染HEPG2细胞细胞后，经流式分选后的细胞扩大培养，但转染后的HEPG2细胞状态不好，贴壁不牢，且细胞之间的间隙很大，感觉互相之间比较抵触。请问大家这是什么情况？

操作步骤 ：本说明书适用于 24 孔培养板的转染实验，其他规格的培养板的用量参照下面表格，表格给出的是每孔的用量与体积。 A. 细胞接种：转染前一天接种细胞，每孔 500 μl 培养基（不可加抗生素），使细胞在转染时密度在 30-50%。 B. siRNA-RFect 混合物准备： 1. 6pmol siRNA 用 50μl 无血清培养基稀释。 2. 2μl RFect 用 50μl 无血清培养基稀释。轻轻混匀，室温孵育 5min。 注意：确保在 25 min 内执行第三步操作，不要过于延迟。 3. 孵育 5min 后，将 siRNA 稀释液

BIOG产品简介 Elite Fect-I小核酸活体组织转染试剂专门用于活体动物组织和脏器的小核酸介入转染。Elite Fect-I可用来转染siRNA、antisense RNA、microRNA等200bp以内的小分子RNA和DNA，目标转染脏器可以是肝脏、肺脏、（肾脏、乳腺、胰腺、脾脏）等脏器，也可以是转移瘤、肌肉、(骨髓)等组织。Elite Fect-I使用简便，只需将siRNA与Elite Fect-I充分混合，再局部注射入靶脏器或靶组织即可。Elite Fect-I不仅可以转染活体小鼠，还可以转染活体大鼠和兔子等。有关Elite Fect-I

BIOG产品简介 Elite Fect-I小核酸活体组织转染试剂专门用于活体动物组织和脏器的小核酸介入转染。Elite Fect-I可用来转染siRNA、antisense RNA、microRNA等200bp以内的小分子RNA和DNA，目标转染脏器可以是肝脏、肺脏、（肾脏、乳腺、胰腺、脾脏）等脏器，也可以是转移瘤、肌肉、(骨髓)等组织。Elite Fect-I使用简便，只需将siRNA与Elite Fect-I充分混合，再局部注射入靶脏器或靶组织即可。Elite Fect-I不仅可以转染活体小鼠，还可以转染活体大鼠和兔子等。有关Elite Fect-I

操作步骤 ：本说明书适用于 24 孔培养板的转染实验，其他规格的培养板的用量参照下面表格，表格给出的是每孔的用量与体积。 A. 细胞接种：转染前一天接种细胞，每孔 500 μl 培养基（不可加抗生素），使细胞在转染时密度在 30-50%。 B. siRNA-RFect 混合物准备： 1. 6pmol siRNA 用 50μl 无血清培养基稀释。 2. 2μl RFect 用 50μl 无血清培养基稀释。轻轻混匀，室温孵育 5min。 注意：确保在 25 min 内执行第三步操作，不要过于延迟。 3. 孵育 5min 后，将 siRNA 稀释

目前常见的转染试剂包括RFect、Lipo2000及国内其它厂家的产品，主要转染对象为贴壁培养细胞，对悬浮细胞和原代细胞的转染效率都不是非常理想。Lipo2000对原代和悬浮细胞基本上无法做到有效转染，而且因为原代细胞较驯化的细胞株敏感性更高，Lipo2000转染后的死亡率也很高。RFect系列质粒DNA转染试剂细胞毒性较低，根据转染的细胞种类不同，可以选购RFect质粒DNA转染试剂或者RFectSP悬浮细胞质粒DNA转染试剂。

有没有懂raw细胞的，我给raw加刺激，结果刺激组好多细胞飘了，control组确正常，是不是因为我刚种板不到3小时就换液加刺激所导致的

RFect可用来转染 siRNA、antisense RNA、microRNA 等 200bp 以内的小分子 RNA 和 DNA，转染细胞包括绝大多数贴壁生长的细胞，如一般细胞株、肿瘤细胞株等。 【常州百代生物】

准备做Jurkat细胞的稳转实验，现在在做G418的浓度梯度测试，但Jurkat细胞是悬浮细胞，换液的时候需要离心操作吗？

请问，THP-1巨噬细胞能不能用lip-2000转染某一miRNA的mimic和inhibit？有篇中文说，脂质体 2000 不适宜转染 THP-1 巨噬细胞。

求助！！！近期用12孔板，做293T细胞的磷酸钙转染，排板时细胞密度一样，48小时后，第1,2,3，8孔板细胞死亡，其它孔板没问题，请各位师兄师姐帮忙看看是什么原因啊？在线急等图一为正常图片

我用lipo2000转染SW480细胞，两个质粒都是用同一种试剂盒提取的，转染用量是根据lipo2000说明书上来的（24孔板0.8ug/孔）。为什么空载体的转染效率和空载的效率相差这么多？是什么原因导致这种差距的呢？

已有众多的文献报 道，脂质体本身会参与细胞生理活动,引起基因表达的上调或下调。如参与PKC（蛋白激酶C）通路调节(Biochemistry.1992 Sep 22;31(37):9025-30)；如抑制ATP酶的活性(Biochim Biophys Acta.2008Apr;1777(4):362-8)；如与线粒体膜发生作用(J Biol Chem. 1989 Jan25;264(3):1508-15)；转染siRNA造成脱靶效应等等。细胞毒性的大小往往意味着对细胞生理活动影响的大小，脂质体这些作用是造成细胞毒性的根本原因。这会对相关研究数据产生严重的干扰，甚至影响研究的结论。

Hela细胞瞬时转染总是失败，我做的是hela细胞的瞬时转染，然后设了一个pccl-GFP组来观察转染效率，在转染24h于荧光显微镜下观察荧光，做了好几次，都只是几颗绿色荧光，什么原因啊？使用的是脂质体转染，lip2000按照质粒：lip2000=1：2的比例加入，还希望大神指点，到底是什么原因。

简介 RFect Plasmid DNA Transfection Reagent是我公司研发团队经过上百次实验、在DeofectEU Transfection Reagent 的基础上进一步优化研发成功的专门用于质粒DNA细胞转染的转染试剂。RFect Plasmid 具有非常卓越的转染性能，可高效转染多种贴壁细胞、原代细胞和悬浮细胞，转染效率在贴壁细胞中高达90%以上（EGFP质粒）。RFect Plasmid 不仅可转染较大分子的质粒DNA，还可转染RNA和小分子DNA。与目前市场上常见的脂质体转染试剂不同，RFect Plasmid 采用生物可降解材料配制，对

悬浮细胞 英文名：SuspensionCell 定义：细胞生长丌依赖支持物表面，在培养液中呈悬浮状态生长，这类细胞称为悬浮细胞。 悬浮培养的细胞一般为淋巴细胞等血液系统来源的细胞，这种细胞体积小，它们天生就生活在悬液 （血液中）。由亍缺乏粘附分子的表达，在培养基 中便自然呈现悬浮状态，细胞大体呈球形戒椭球形。 简介：RFectSP Plasmid DNA Transfection Reagent是我公司研发团队在RFect Plasmid DNA Transfection Reagent 的基础上进一步优化研发成功的专门用于悬

最近开始做siRNA转染，遇到了很多问题，但实验室里之前无人做过这方面的实验，特此恳请各位转染大神帮助！我要转染的细胞系是转染最常用HEK293细胞，转染体系是6孔板和6 cm皿，目的是要敲低一个分子量300多kD的蛋白质，3条siRNA和Lipofectamine2000均购自Invitrogen公司。

产品简介 RFect siRNA转染试剂是一种采用新型的动物源性的纳米材料，毒性很低并且拥有非常卓越转染性能的一种小核酸转染试剂。RFect可用来转染siRNA、antisense RNA、microRNA等200bp以内的小分子RNA和DNA。RFect使用极其简便，先将siRNA与RFect室温混合，再将siRNA-RFect 混合物直接加入含培养基的细胞，血清对转染效果没有影响，不必刻意添加或更换培养液。有关RFect siRNA转染试剂的材料合成和试剂配制我们已申请了国际专利，并通过PCT覆盖国际上多个国家和地区

用lonza的nucleofector电转了jurkat细胞，但是效率很低，后来又尝试了脂质体2000还是不行，转不进去且细胞几乎全部死亡，有经验的战友请出来传授一下。

最近在做HepG2细胞转染时，培养前细胞状态还可以，但转染后就发现细胞就不行了，很多都出现萎缩现象，还有很多都漂浮起来，转染试剂没问题，也不知道那些环节出现了问题，请各位战友给予帮助分析一下！

我最近转染jurkat 瞬转 先用脂质体2000 后用fugene hd 都效果很差。后来用电转，bio-rad的gene pulser xcell 电转仪，采用0.2的杯子 程序采用预设程序。140v 1000uf 无穷电阻 指数波。仍然转不进去，且细胞几乎全部死亡。质粒在293T里面表达没有任何问题，请问各位战友有何建议？电转程序有哪里可以改进的？先谢谢了

293T细胞转染后呈现皱缩状态，是什么原因

请问各位大师：悬浮细胞HL60细胞，如果用质粒转染的话该怎么样才能提高转染效率呢？我用了电转，300V，24.3ms, 电容950，可是虽然细胞死了过半，可是效率还是很低？我该怎么做呢？有没有专门针对HL60细胞的转染试剂盒呢？

A549转染siRNA用lipo2000能转进去吗?转染后60小时左右做wb和PCR，做出来没效果，我还把普通灭菌的耗材全部换成过无酶，也看不到荧光。是不是A549用脂质体转不进去的原因呢？

本人实验新手一枚，前段时间用RFect sRNA Transfection Reagent转染了A549细胞，附图如下，请有经验的哥哥姐姐们给我看看

近期，上海公卫临床研究中心的一位研究生应用两种转染试剂Turbofect transfection reagent（Thermo）和EntransterTM-R4000（Engreen）进行了一次RNA转染比较。比较情况如下： 实验方法 转染试剂：Turbofect transfection reagent（Thermo）和EntransterTM-R4000（Engreen Biosystem Co,Ltd） 待处理细胞：human CD8+T 细胞 1.针对Turbofect转染的方法 每孔培养体积均为100μL，细胞数目在105左右。 取0.5μLagomir，加入9.5μL无血清RPMI1640，充分混匀； 取0.2μL Turbofect transfection reagent和agomir稀释液充分混

由于RNAi实验技术的推广和应用，人们对特定基因“敲除”或“沉默”变得越来越简单，研究也越来越多。在 体外培养细胞中进行RNAi实验已经比较容易，人们只需要选择合适的培养细胞系，用特定的核酸和转染试剂即可完成相应的转染。随着研究的深入，人们需要将 研究从经过人工改造的细胞和模拟的简单的人工培养环境，转向自然的细胞和体内自然复杂的环境，揭示更符合真实自然的疾病和生命秘密，并向应用更进一步。 但以前动物实验往往让人

体内转染试剂通过纳米技术合成，通过物理作用与核酸结合，浓缩包裹核酸，从而保护核酸免受免疫系统破坏，同时增强核酸进入细胞核中表达。不含任何动物来源成分，由于处于纳米尺度，粒径小，不易引起免疫反应，不影响动物和器官组织的功能，可以多次在同一动物注射。

做siRNA转染到昆虫细胞，之前用lipo，但感觉毒性大，效率低，有没有好的转染试剂推荐？要转染效率高的，价格便宜的，实验室经费有限。

我最近用lipofectamine 2000介导siRNA转染贴壁细胞，结果出来细胞的死亡率较高，是怎么回事？

将siRNA转染入贴壁动物细胞（如哺乳动物细胞系、昆虫细胞系）。 以24孔板siRNA转染为例： (1) 转染前一天，接种适当数量的细胞至细胞培养板中，使转染

已有众多的文献报道，脂质体本身会参与细胞生理活动,引起基因表达的上调或下调。如参与 PKC（蛋白激酶C）通路调节(Biochemistry.1992 Sep 22;31(37): 9025-30)；如抑制ATP酶的活性(Biochim Biophys Acta.2008 Apr;1777(4):362-8)；如与线粒体膜发生作用(J Biol Chem. 1989 Jan 25;264(3):1508-15)；转染siRNA造成脱靶效应等等。细胞毒性的大小往往意味着对细胞生理活动影响的大小，脂质体这些作用是造成细胞 毒性的根本原因。这会对相关研究数据产生严重的干扰，甚至影响研究的结论

使 用脂质体等转染试剂时，由于含血清转染会将血清中的蛋白带入细胞，引发细胞毒性，导致转染效率降低，故不能有血清转染。EntransterTM只浓缩包裹核酸不会将血清带入细胞，所以可以有血清转染，同时由于血清的存在，有利于细胞的状态维护，故能提高转染效率。

稳定转染和瞬时转染，细胞转染的步骤基本相同，只是在转染后的细胞处理会不一样。由于瞬时转染只能维持几天，故在转染12～72后就可以在蛋白或基因水平

下面以50μg的核酸与25μl转染试剂，总注射体积200μl，20g小鼠尾静脉注射为例说明。局部注射不用稀释，直接根据需要把核酸和转染试剂混合即可使用。 1.核酸的稀释。将50μg核酸用适量无内毒素纯水稀释成1μg/μl，加入10%葡萄糖溶液(w/v)50μl，使葡萄糖终浓度为5%，终体积为100μl，充分混匀。 2.转染试剂的稀释。取25μl的EntransterTM-in vivo试剂用50μl的10%葡萄糖溶液稀释，并用纯水25μl补足，得到葡萄糖终浓度为5%，终体积为100μl液体，充分混匀。 3.转染复合

成功转染siRNA的细胞会产生目标基因表达下调，但未成功转染的细胞却不受影响，这时转染效率和总的细胞数量就很重要，一般细胞数量较少时转染效率高，一些试剂由于本身毒性的影响，太低的细胞数量时毒性明显，所以会要求较高的细胞密度（汇合度），顺便说一句，看一个转染试剂的毒性，看它要求转染时的细胞密度就知道了。siRNA的转染和DNA的转染不一样，DNA的转染是过量表达，死亡一些细胞对过量表达的蛋白本身来说影响不大，但siRNA的转染

下面以50μg的核酸与25μl转染试剂，总注射体积200μl，20g小鼠尾静脉注射为例说明。局部注射不用稀释，直接根据需要把核酸和转染试剂混合即可使用。 1.核酸的稀释。将50μg核酸用适量无内毒素纯水稀释成1μg/μl，加入10%葡萄糖溶液(w/v)50μl，使葡萄糖终浓度为5%，终体积为100μl，充分混匀。 2.转染试剂的稀释。取25μl的EntransterTM-in vivo试剂用50μl的10%葡萄糖溶液稀释，并用纯水25μl补足，得到葡萄糖终浓度为5%，终体积为100μl液体，充分混匀。 3.转染复合

可能原因： 给药剂量低 注射操作有误 核酸用量过大 注射液中含内毒素 解决方法： 在不造成动物死亡前提下，提高给药剂量 将药液正确注射到相应部位 降低核酸用量，保持核酸和转染试剂比例，同步降低转染试剂用量。 采用无内毒素的核酸 注射前，采用0.22μm滤器过滤除菌

一般根据课题研究要求进行，如果单纯检测转染效率，推荐用qRT-PCR方法和luciferase方法。还可根据研究，采用组织学和生理学，以及物理测量的方法进行。由于体内转染的复杂性，通常体外试验中常采用的转染GFP蛋白用荧光显微镜观察的方法，由于体内取出的组织材料背景高，检测较为困难。

RNA与转染试剂比例不佳 由于RNA序列差异、合成条件不同以及是否带有荧光等标记，决定了RNA和转染试剂在不同情况下会有不同的最佳条件，建议先进行预实验优化。 RNA浓度和转染试剂量的优化(24well) 1 2 3 4 RNA工作浓度 25nM 50nM 100nM 150nM 每孔RNA的量(pmol) 0.17μg (12.5pmol) 0.33μg (25pmol) 0.67μg (50pmol) 1μg (75pmol) 每孔转染试剂量 0.25μl 0.5μl 1μl 1.5μl 细胞密度不佳 调整细胞密度到转染时汇合度为20-40%。成功转染siRNA的细胞会产生目标基因表达下调，但未成功转染的

①转染的核酸，如siRNA，miRNA，mimic、inhibitor，也可以转染DNA。 ②转染试剂和动物。 ③进行注射的器材。

1.Biomed Res Int. 2014;2014:898646.Trichinellaspiralis excretory-secretory products protect against polymicrobial sepsis bysuppressing MyD88 via mannose receptor.(免疫系统) 2.Mol Cancer. 2014 Sep 6;13(1):206.Let-7dsuppresses growth, metastasis, and tumor macrophage infiltration in renal cellcarcinoma by targeting COL3A1 andCCL7.(肿瘤相关研究) 3.Cell Death Dis. 2014 Aug 21;5:e1382.Amyloid-β inducesNLRP1-dependent neuronal pyroptosis in models of Alzheimer's disease.(阿尔茨海默病) 4.Neurosci Lett. 2014 Mar 11.Autophagic effectof programmed cell death 5 (PDCD5) after focal ce

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